Una identificación más rápida de las especies de mosquitos es posible gracias a las mejoras del CDC en los métodos de prueba de ADN

Una identificación más rápida de las especies de mosquitos es posible gracias a las mejoras del CDC en los métodos de prueba de ADN

22 de agosto de 2017 <img src="https://antimoscas.es/wp-content/uploads/aegypti-or-albopictus.jpg" "¿Aedes aegypti o Aedes albopictus?"

<¿Puedes decir cuál de estos mosquitos es Aedes aegypti y cuál es Aedes albopictus? Incluso para los entomólogos profesionales, identificar visualmente los mosquitos salvajes a las especies requiere criarlos en larvas de cuarto estadio o adultos. Sin embargo, un nuevo conjunto de mejoras en un método de pruebas de ADN desarrollado por el CDC, permitirá una identificación más rápida de la presencia de cualquiera de las especies (o ambas) en una muestra recogida de larvas de primer estadio. Y, para responder a la pregunta, eso es Ae. albopictus a la izquierda y Ae. aegypti a la derecha. (Créditos fotográficos: James Gathany, CDC Public Health Image Library)

Un paso crucial en el manejo de las enfermedades transmitidas por mosquitos es saber exactamente qué tipo de mosquitos están presentes en un lugar determinado. ¿Son especies de jardín que no son portadoras de patógenos humanos, o son vectores potencialmente peligrosos como Aedes aegypti o Aedes albopictus?

Identificar y discernir entre esas dos especies es importante también, ya que su capacidad para transmitir patógenos de enfermedades particulares varía. Los métodos existentes para identificar las especies requieren la colocación de ovitrapos (que atraen a las hembras adultas de los mosquitos para que pongan huevos) y la cría de los huevos recolectados en larvas de cuarto estadio o adultos para su identificación visual, lo que lleva por lo menos cuatro días. También existen métodos de prueba de ADN, pero con algunas complicaciones. Sin embargo, los esfuerzos de los investigadores de los Centros para el Control y la Prevención de Enfermedades de los Estados Unidos (CDC) y de la Universidad de Carolina Occidental han dado como resultado mejoras significativas en los métodos de prueba de ADN que los harán más rápidos y accesibles para los laboratorios de mosquitos de todo el país.

Informado en julio en el Journal of Medical Entomology, el nuevo proceso es un "ensayo PCR dúplex en tiempo real". La PCR (reacción en cadena de la polimerasa) permite a los científicos amplificar muestras de ADN con diversos fines, incluida la identificación de especies, y se viene utilizando desde hace más de 20 años. Pero el nuevo protocolo desarrollado por un equipo dirigido por la Dra. Linda Kothera, microbióloga del CDC en el laboratorio del Dr. Harry M. Savage, acelera el proceso de discernimiento de los vectores Aedes en algunas formas importantes, permitiendo el uso de:

  • dos tintes fluorescentes, uno para Ae. aegypti y otro para Ae. albopictus, para permitir la identificación de una o ambas especies en una sola prueba, en lugar de hacerlo en pruebas separadas
  • PCR "en tiempo real", lo que elimina un paso de visualización separado necesario en las pruebas tradicionales de PCR
  • muestras de ADN combinadas, lo que significa que el ADN de múltiples muestras de mosquitos pueden ser agrupadas, en lugar de probar individualmente
  • larvas de primer estadio, que pueden ser criadas a partir de huevos en unas pocas horas, en lugar de unos pocos días
  • muestras de ADN de larvas sonicadas, lo que puede hacerse con un sonicador común de joyería, una opción menos costosa comparada con los kits de extracción de ADN (aunque cualquier método de extracción de ADN funcionará). </Estas mejoras "agilizan el proceso y reducen la cantidad de tiempo necesario para identificar la composición de las especies", dice Kothera. "El nuevo ensayo es más sensible a pequeñas cantidades de ADN que los ensayos anteriores que utilizaban la PCR regular."

    Los ensayos de PCR utilizados de esta manera prueban segmentos específicos de ADN que son únicos para una especie, para servir como señal de la presencia de la especie en la muestra. Para distinguir entre Ae. aegypti y Ae. albopictus, el equipo de Kothera se centró en los genes que conducen el sentido del olfato de los mosquitos.

    "Hice la hipótesis de que Aedes aegypti, debido a su fuerte preferencia por los huéspedes humanos, podría tener secuencias de ADN diferentes en sus genes receptores de olor en comparación con Ae. albopictus, que picará a los humanos pero también toma harinas de sangre de otros huéspedes. En otras palabras, pensé que estos genes serían más o menos específicos de la especie", dice Kothera.

    Esa hipótesis resultó exitosa, y los fragmentos del gen receptor de olor buscados en la prueba señalarán la presencia de cualquiera de las dos especies en la muestra, y Kothera y sus colegas también comprobaron la prueba contra otras siete especies de mosquitos Aedes para asegurarse de que su presencia no diera lugar a falsos positivos. </Al compartir el nuevo método en el Diario de Entomología Médica, Kothera, Savage, y su co-autor, Brian Byrd, Ph.D., en el Programa de Salud Ambiental de la Universidad de Carolina del Oeste, esperan permitir a los laboratorios de mosquitos de todo el mundo mejorar su capacidad de detección de mosquitos vectores.

    "Una determinación precisa de la composición de las especies es importante para el control efectivo de los vectores. Aunque la morfología puede utilizarse para distinguir las especies en ciertas etapas de la vida, la cría de mosquitos en condiciones controladas requiere tiempo, espacio y recursos de laboratorio. Los métodos de identificación basados en la PCR reducen el tiempo necesario para identificar las especies, y los ensayos en tiempo real eliminan la necesidad de un paso de visualización separado. Nuestro ensayo identifica Ae. aegypti y Ae. albopictus a partir de larvas de primer estadio sonicadas, y puede servir como herramienta para informar a las agencias de control de vectores mientras llevan a cabo la vigilancia y trabajan para limitar la propagación de los patógenos transmitidos por los mosquitos", escriben.

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